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影响ELISA试剂盒测定成果的原因及解决办法

发布时间:2022-05-22    点击次数:103

  影响ELISA试剂盒测定成果的原因及解决办法
 

  ELISA试剂盒方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定,具有灵敏度高,操作简略等优点,但是在详细实验过程中影响要素较多,而且要按照严厉的阐明要求,在临床检验中除正常反响外,有时常可见到一些错误成果(即假阳性或假阴性成果)。

  影响ELISA测定错误成果的原因主要有:

  ①标本要素;

  ②试剂要素;

  ③操作要素。

  一、类风湿因子

  人血清中IgM、IgG型类风湿因子(RF)能够与ELISA系统中的捕获抗体及酶符号二抗的FC段直接结合,然后导致假阳性。

  解决办法:

  1.用F(ab)2替代完好的IgG;

  2.标本用联有热变性(63℃,10 min)IgG的固相吸附剂处理(将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有用);

  3.检测抗原时,能够用2-巯基yi醇等加入到标本稀释液中,使RF降解。

  二、补体

  ELISA系统中固相一抗和符号二抗过程中,抗体分子发作变构,其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来,使C1q  能够将二者连接起来,然后形成假阳性。

  解决办法:

  1.用EDTA稀释标本;

  2.用53℃,10 min或56℃,30 min加热血清使C1q灭活。

  三、嗜异性抗体

  人类血清中含有能与啮齿类动物(如鼠等)Ig(s)结合的天然嗜异性抗体,可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来,也能形成假阳性。

  解决办法:

  可在标本稀释液中加入过量的动物Ig(s),但加入量不足或亚类不同时无效。

  四、嗜靶抗原的本身抗体

  抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的本身抗体,有时能与靶抗原结合形成复合物,在ELISA方法中均可干扰抗原抗体测定成果。

  解决办法:

  测定需用理化方法将其解离后再测定。

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